Prueba de Voges Proskauer

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN
CRISTÓBAL DE HUAMANGA
Facultad de Ciencias Biológicas
BACTERIOLOGÍA
BI - 442
PRÁCTICA N° 10
Prueba de Voges Proskauer
DOCENTE: Dr.CÁRDENAS LÓPEZ, Víctor Luis
INTEGRANTE: SULCA QUISPE, Erika Jacqueline
GRUPO: Lunes 5- 8pm (segundo grupo)

OBJETIVOS
❖ Conocer el fundamento de la prueba de Voges

Proskauer
❖ Aprender a realizar la prueba de VP y conocer
la capacidad de algunos organismos de
producir un producto final neutro. el
acetilmetilcarbinol (acetoína), a partir de la
fermentación de la glucosa (fermentación
butilen-glicólica)
❖ Aprender a realizar la lectura y reportar
correctamente la interpretación de resultados.
INTRODUCCIÓN
Fermentación butilén glicólica: La

realizan las bacterias del grupo
Klebsiella Enterobacter. Los
Es una prueba bioquímica que se
productos finales son compuestos
emplea fundamentalmente para la
neutros como el butanodiol y el
identificación de las Enterobacterias,
etanol, produciéndose acetoína como
anaerobios facultativos que utilizarán
intermediario que podrá ser
la glucosa en dos fases: Primero la
detectada añadiendo al medio KOH
metabolizan aeróbicamente,
(reactivo A de Voges Proskauer) y
consumiendo rápidamente el oxígeno
α-naftol (reactivo B de Voges
del medio, para, en segundo lugar,
Proskauer) que reaccionarán con
continuar metabolizados por vía
este compuesto produciendo un color
anaerobia (fermentación).
rojo característico.
FUNDAMENTO
Determinar la capacidad de algunos

microorganismos para producir un
producto final neutro,
acetilmetilcarbinol (AMC, acetoína), a
partir de la fermentación de la glucosa.
Voges y Proskauer fueron los primeros

bacteriólogos en observar una
coloración roja en los medios de
cultivo después del tratamiento con
hidróxido de potasio.
PRINCIPIOS BIOQUÍMICOS
La reacción de V.P. se
basa en la detección
de acetoína a partir de
la fermentación
butanodiólica de la
glucosa. A partir del
ácido pirúvico, el
principal intermediario
de la glucólisis.
A partir del ácido pirúvico, las

bacterias pueden seguir
muchos caminos metabólicos;
la producción de acetoína es
una de las vías metabólicas
de la degradación de la
glucosa en las bacterias.
La prueba de Voges-Proskauer para la

acetoína se utiliza sobre todo para
separar Escherichia coli de los grupos
Klebsiella Enterobacter, que se
caracterizan como fermentadores de
ácidos mixtos o del ácido fórmico, lo
que indica que sus productos finales de
la fermentación de la glucosa son
ácidos.
Producto final de la fermentación

butanodiólica es el 2,3 butanodiol,
en que la acetoína es el
precursor. La prueba V.P. se basa
en la detección de éste último.
La acetoína que se produce en la
fermentación, cuando reacciona
con el hidróxido de potasio (KOH
al 40% p/v) es oxidada, en
presencia de oxígeno
atmosférico, a diacetilo, el que a
su vez reacciona con los grupos
guanídicos de la arginina, que
está presente en las peptonas
que constituyen el medio, dando
una coloración rojiza
MATERIALES
➔ Tubo de 9 mL de medio de
clark y lubs
➔ citrato: 1 tubo de agar
inclinado de citrato de
Simmons
➔ Mechero bunsen
➔ Asa de siembra
➔ Agitador
➔ Estufa de cultivo
PROCEDIMIENTO
Medio de cultivo:
Es el mismo que para la reacción de rojo de metilo.CALDO MR/VP (pH 6,9)
Ingredientes por litro de agua desionizada:
peptona tamponada = 7,0 g
glucosa = 5,0 g de
fosfato dipotásico = 5,0 g
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
A. Reactivos VP de Barrit.
Reactivo A: α-naftol al 5% en alcohol etílico absoluto (etanol).
Reactivo B: hidróxido de potasio (KOH) al 40%.
MÉTODO DE UTILIZACIÓN
1. Retirar una alícuota para la determinación de V.P la prueba de Barrit: 2,5 ml.
2. Agregar los reactivos VP
a. Primero 0,6 mL (6 gotas) del reactivo A.
b. Segundo: 0,2 mL (2 gotas) del reactivo B.
c. Agitar los tubos con suavidad durante 1 min
3. Permitir que los tubos reposen durante un tiempo apropiado antes de intentar
interpretar el color.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
1. Agregar los reactivos de Voges-Proskauer directamente a una alícuota
incubada antes de intentar realizar la interpretación.
VP negativo (-): color amarillo

en la superficie del medio
VP positivo (+): color (igual color que el reactivo)
rosado-rojo en la puede formarse un color
superficie del medio cobrizo, pero es un resultado
(acetoína presente) negativo (debido a la reacción
de los reactivos cuando se
mezclan).
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Limitaciones de la prueba de Voges-Proskauer (VP)
1. Los resultados de las pruebas VP deben usarse junto con otras pruebas bioquímicas para
diferenciar géneros y especies dentro de las Enterobacteriaceae .
2. Los reactivos VP deben agregarse en el orden y las cantidades especificadas o puede
ocurrir una reacción débil positiva o falsa negativa. Una reacción débil-positiva puede estar
enmascarada por un color similar al cobre que puede formarse debido a la reacción de
KOH y a-naftol.
3. Lea la prueba VP dentro de la hora siguiente a la adición de los reactivos. El KOH y el
a-naftol pueden reaccionar para formar un color similar al cobre, lo que puede provocar una
posible interpretación de falso positivo.
4. Algunos organismos destruyen la acetoína, lo que invalida las pruebas de VP.
5. Agitar los tubos mejora la reacción de VP.
CONCLUSIONES
❖ Se logró conocer el fundamento de la prueba de Voges

Proskauer
❖ Se determinó la capacidad de algunos organismos como
Klebsiella enterobacter de producir un producto final neutro. el
acetilmetilcarbinol (acetoína), a partir de la fermentación de la
glucosa (fermentación butilen-glicólica)
❖ Se aprendió a realizar la lectura e interpretación de
resultados.
T
TTO
OO
TRR
RA
AA
I
CCCI
ITT
L
EEEL
L
AAADD
D
U E
EB
EBB
PPPRRRU
U
FUNDAMENTO
Esta prueba se usa para distinguir aquellos

microorganismos que poseen la capacidad de emplear
citrato como única fuente de carbono y sales inorgánicas
de amonio como única fuente de nitrógeno (Forbes et al.,
2009).
La utilización de citrato depende de la existencia de la
enzima citrato permeasa producida por el microorganismo,
esta enzima ayuda al transporte del citrato hacia el interior
de la célula.
El azul de bromotimol se utiliza como indicador (verde a
pH neutro y azul a pH mayor a 7.6); cuando el citrato de
sodio se metaboliza, se genera dióxido de carbono que se
combina con sodio y agua para formar carbonato sódico
que es un producto alcalino responsable del cambio de
color del indicador de verde a azul siendo esto una prueba
positiva
RESULTADOS
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Una prueba positiva está representada por la aparición
del color azul oscuro después de 24 a 48 horas, lo que
Medio de Citrato de Simmons indica que el microorganismo en estudio ha sido capaz
Sustrato: Citrato de sodio. de utilizar el citrato contenido en el medio, con la
Indicador: Azul de bromotimol. producción de productos alcalinos. Una prueba
también puede ser positiva en ausencia de color azul
si hay crecimiento de colonias visibles a lo largo de la
línea de inoculación, esto es posible porque para que
el crecimiento sea visible, el microorganismo debe
ingresar a la fase logarítmica o exponencial, lo que se
puede observar incubando el cultivo durante 24 horas
más, con lo que habitualmente aparece un color azul.
VIDEO
BIBLIOGRAFÍA
❖ Romero, R. (2007). Microbiologia y parasitologia humana Ciudad de México, Mexico: Editorial Médica
Panamericana[fecha de acceso 1 de julio del 2021].disponible
en.http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/07-Metabolismo-Identific
acion-y-taxonom%C3%ADa.pdf
❖ Rodríguez, E., Gamboa, M., Hernández, F., & García, J. (2005). Bacteriología General: Principios Y
Prácticas de Laboratorio. San José , Costa Rica: Editorial de la Universidad de Costa Rica.[fecha de
acceso 1 de julio del 2021].disponible en:
https://microbiologyinfo.com/voges-proskauer-vp-test-principle-reagents-procedure-and-result/
❖ Parés, R., & Juárez, A. (2002). Bioquímica de los microorganismos. Barcelona, España: Editorial
Reverté [fecha de acceso 1 de julio del 2021].disponible
en:https://www.academia.edu/35895755/Bioquimica_de_Los_Microorganismos

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❖ Conocer el fundamento de la prueba de Voges

Fermentación butilén glicólica: La

Determinar la capacidad de algunos

Voges y Proskauer fueron los primeros

A partir del ácido pirúvico, las

La prueba de Voges-Proskauer para la

Producto final de la fermentación

VP negativo (-): color amarillo

❖ Se logró conocer el fundamento de la prueba de Voges

Esta prueba se usa para distinguir aquellos

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