COPROCULTIVO

NOMBRE DE LA PRCTICA: Coprocultivo
MATERIAL:
Asa bacteriolgica Mechero Fisher
Estufa de incubacin a 37C
Agares estriles de SS, EMB, Mc Conkey,
Caldo tetrationato, agar sulfito bismuto
Agar verde brillante.
Una muestra de heces recolectada en frasco estril
Hisopos estriles
INTRODUCCIN
Las Enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del tracto
intestinal del hombre. En ella se incluyen grmenes comensales (Proteus y bacilos
coliformes), as como patgenos del gnero Salmonella y Shigella. El vibrin
colrico puede ser aislado de casos de clera.
Durante las infecciones entricas, cuando se presentan patgenos tales como
Salmonella y Shigella, el bacterilogo debe distinguir entre los habitantes normales
del intestino y los agentes etiolgicos de enfermedad.
Es importante destacar que las bacterias intestinales toman parte en los procesos
digestivos tanto del hombre como de los animales. Ellos ayudan a la sntesis de
vitaminas del complejo B y de la vitamina K.
La materia fecal evacuada debe ser reciente y deben cultivarse lo ms pronto
posible despus de haber sido recolectada. Las muestras debern obtenerse al
inicio del cuadro clnico, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano.
Las muestras de heces se pueden tomar directamente en un frasco limpio de boca
ancha y con tapa hermtica, de preferencia estril. Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a realizar el aislamiento, no es necesario usar
medio de transporte y hay que sembrar de inmediato.
En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, la muestra se toma
con un hisopo, el cual debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se
coloca en un medio de transporte como el Cary-blair.
PROCEDIMIENTO
1. Introducir un hisopo estril en varios puntos de la muestra.
2. Descargar la muestra en un rea pequea de los medios de cultivo: SS, Mc
Conkey y EMB y realizar el estriado.
3. Incubar las cajas a 37C durante 24 o 48 horas
4. Observar las caractersticas morfolgicas de las colonias desarrolladas
indicando si existen cambios en el medio, pigmentos en la colonia etc.
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5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se
manifiestan como colonias de color blanco en Mc Conkey e incoloras en
EMB.
6. Al mismo tiempo que las placas, con la muestra fecal se inocula un medio
de enriquecimiento como el caldo tetrationato, colocando el hisopo
impregnado con la muestra en el caldo al cual se le agreg previamente
0.2 ml de yodo por gramo de materia fecal.
7. Incubar este medio de enriquecimiento por 12 o 18 horas a 37C
8. A partir del caldo tetrationato se siembran placas con medios inhibitorios
como el agar verde brillante y el agar sulfito de bismuto, este ltimo si se
est buscando S. typhi. Despus de incubar a 37C durante 24 horas la
placa de verde brillante y 48 horas la de sulfito bismuto, se revisan
cuidadosamente en busca de colonias sospechosas. En el verde brillante
Salmonella crece como colonias rojas y en sulfito de bismuto como colonias
negras.
9. Para mayor seguridad en la identificacin de Enterobacterias es necesario
realizar pruebas bioqumicas a las cepas aisladas en los medios de cultivo.
Las ms comunes son IMVIC
En el siguiente cuadro indica las caractersticas morfolgicas de las diferentes
bacterias en cada uno de los medios de cultivo:
CUESTIONARIO
1.- Cules son las principales bacterias patgenas que pueden ser aisladas por
medio del coprocultivo? Qu enfermedades producen cada una de stas?
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2.- Investiga el protocolo para el aislamiento e identificacin del vibrin cholerae:
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3.- Explica brevemente en qu consisten las pruebas de Indol, Rojo de Metilo,
Voges-Proskauer y Citrato (IMVIC):
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