녹두핵산가수분해효소

Mung bean nuclease

녹두뉴클레아제(뉴클레아제 MB)는 녹두(Vigna radiata)의 새싹에서 유래한 뉴클레아제이며, 단일가닥 DNA 분자(ssDNA)로부터 단계적으로 뉴클레오티드를 제거하고, 또한 이중가닥 DNA(DSNA)를 포함한 혼합물로부터 이러한 ssDNA를 제거하는 생명공학 응용에 사용된다.이 효소는 전사 매핑, DNA 하이브리드의 단일 가닥 영역 제거 또는 제한 효소에 의해 생성된 단일 가닥 돌출 등에 유용합니다.뉴클레아제 S1(둘 다 EC 3.1.30.1)과 유사한 활성을 가지지만, 단가닥 [1]분자에 대해서는 특이성이 더 높다.

이 효소는 단가닥 DNA 또는 RNA를 뉴클레오사이드 5'-단인산염으로 분해하지만 이중가닥 DNA, 이중가닥 RNA 또는 DNA/RNA 하이브리드는 소화하지 않는다.녹두핵산가수분해효소(Mung Bean Nuclease)는 단가닥 DNA 또는 RNA의 특이적 분해를 촉매하고 5μ-P 말단을 가진 모노 및 올리고뉴클레오티드를 생성한다.녹두핵산가수분해효소는 DNA 또는 RNA에 대해 엄격한 단일 가닥 특이성을 가지고 있다.

녹두핵산가수분해효소는 SDS-PAGE 기준 추정 분자량이 39 kDa이다.당단백질, 이 질량의 29%가 [2]당입니다.2019년 4월 현재, 이 단백질을 코드하는 특정 유전자는 알려지지 않았으며,[1] 모든 생산은 1980년부터 콩나물 정제 과정에 의존하고 있다.일부는 노출된 시스테인 잔기 1개와 디술피드 결합 3쌍으로 구조에 대해 알려져 있다.일부는 그것의 아미노산 [2]조성에 대해 알려져 있다.

요구 사항들

녹두핵산가수분해효소는 Zn을 필요로2+ 한다.EDTA 또는 SDS의 추가는 되돌릴 수 없는 불활성화를 일으킵니다.녹두핵산가수분해효소는 pH가 4.6 이하일 때도 활성되지 않고 염분 농도가 낮을 때도 활성되지 않는다.

묘사

뉴클레아제 MB는 DNA 및 RNA 분자 끝에서 단일 가닥 확장을 분해하여 뭉툭하고 연결 가능한 끝을 남기는 특정 DNA 및 RNA 엑소핵산 분해효소이다.단사슬 특이성이 높아 단일사슬 특이적 핵산가수분해효소를 필요로 하는 대부분의 애플리케이션에서 선택된 효소가 된다.

S1핵산가수분해효소와는 달리, 녹두핵산가수분해효소는 절단된 이중 DNA의 온전한 가닥을 절단하지 않는다.

이중가닥 핵산을 인식하는 능력은 염기서열에 따라 달라진다.

APN과 T(U) pN에서 갈라지는 경향이 있습니다.APA는 완전히 열화되지만 G와 C는 열화되지 않습니다.S1핵산가수분해효소와는 달리 절단된 스트랜드와는 반대되는 스트랜드를 절단하지 않는다.

녹두핵산가수분해효소(Mung Bean Nuclease)는 단가닥 DNA 또는 RNA의 특이적 분해를 촉매하고 5μ-P 말단을 가진 모노 및 올리고뉴클레오티드를 생성한다.

1000배 이상의 효소는 올리고머를 모든 모노뉴클레오티드로 분해할 수 있다.

이중사슬 DNA 또는 RNA 및 DNA-RNA 하이브리드를 분해하기 위해서는 과도한 효소가 필요하며, 이 경우 AT가 풍부한 영역을 선택적으로 분해한다.

이 효소는 A↓pN, T↓pN 부위에서 잘 작용하며, 특히 A↓pN 부위에서 100% 분해된다.

단, C↓pC, C↓pG 부위의 분해는 어렵다.

녹두 엑소핵산가수분해효소는 녹두에서 유래한 핵산가수분해효소로서 단일 가닥 DNA 분자에서 단계적 방식으로 뉴클레오티드를 제거하고 이중 가닥 DNA(dsDNA)를 포함한 혼합물에서 이러한 ssDNA를 제거하기 위해 사용된다.

유닛 정의:

녹두뉴클레아제 1단위는 표준측정조건에서 37°C에서 1분 이내에 열변성 송아지 흉선 DNA 1μg을 산용성 형태로 변환한다.

생명공학 및 생화학 연구에 응용

  • cDNA 합성 중 헤어핀 루프 제거
  • 내부 라벨 부착 프로브 또는 최종 라벨 부착 프로브를 사용하여 RNA 전사체의 흰개미 및 엑손 구조의 고해상도 매핑(일반적으로 Berk-Sharp 또는 S1 Mapping)
  • 단가닥 돌출단 소화에 의한 제한부위 변경 또는 제거
  • TILING의 CEL 1 Nuclease를 대체하는 단일 베이스 쌍의 불일치 분할.
  • 시퀀싱을 위한 순서 결실을 생성하기 위해 (Exonuclease III와 함께) 큰 DNA의 단방향 결실.
  • DNA 또는 RNA 말미니에서 3인치와 5인치 확장을 제거한다.
  • 문자 변환 매핑
  • 머리핀 루프의 갈라짐
  • 게놈 DNA에서 염기서열을 코드하는 유전자 제거.

레퍼런스

  1. ^ a b "BRENDA: 3.1.30.1".
  2. ^ a b Eun, HM (1996). "Nucleases". Enzymology primer for recombinant DNA technology. Academic Press. pp. 145–232. doi:10.1016/B978-012243740-3/50006-5. ISBN 978-0-12-243740-3.

추가 정보

  • Kowalski et al의 1970년대 기사 시리즈: